СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ АМБРОКСОЛА И КОМБИНАЦИИ АМБРОКСОЛА С ГЛИЦИРРИЗИНОВОЙ КИСЛОТОЙ НА МОДЕЛИ ПНЕВМОНИИ IN VIVO
Кукес И.В., Поздняков Д.И., Поромов А.А. и др. Сравнительная оценка фармакологической эффективности амброксола и комбинации амброксола с глицирризиновой кислотой на модели пневмонии in vivo. Фармакология & Фармакотерапия. 2023; 3: 68–78. DOI 10.46393/27132129_2023_3_68
Вопрос рациональности и эффективности комбинированной терапии остается открытым во многих терапевтических областях. Так, при симптоматической терапии кашля одними из наиболее часто используемых препаратов являются продукты на основе амброксола – муколитического и отхаркивающего средства. На российском фармацевтическом рынке помимо монопрепаратов амброксола присутствуют комбинированные лекарственные средства, вторым действу- ющим веществом которых является натрия глицирризинат. Глицирризиновая кислота обладает противовоспалитель- ным и противовирусным действием. Целью настоящей работы было проведение сравнительной оценки эффективности фармакологического действия мо- нопрепарата амброксола и амброксола в комбинации с глицирризиновой кислотой на модели пневмонии in vivo. Респи- раторную патологию моделировали у крыс с использованием бактериальной культуры S. pneumoniae (коллекционные штаммы) в фосфатно-солевом буфере, которую вводили эндотрахеально через гибкий силиконовый зонд в дозе 50 мкл. Экспериментальные животные были разделены на группы по 12 особей в каждой, из которых шесть крыс далее были использованы для получения образцов макропрепаратов, а другие шесть – для лабораторно-инструментальных методов исследования: интактные животные (ИН); негативный контроль (НК); группа с патологией, получавшая комбинацию амброксол + натриевая глицирризиновая кислота (натрий-ГК), соответствующую лекарственному препарату Коделак Бронхо, 125 мг/кг + 189 мг/кг; группа с патологией, получавшая монопрепарат амброксол 125 мг/кг; группа с патологией, получавшая монопрепарат натриевой глицирризиновой кислоты 189 мг/кг. Применение комбинации амброксол + натрий-ГК способствовало снижению проницаемости сосудов в сравнении с группой НК на 39,1; 10,5 и 23,4% (p < 0,05) соответственно. Отмечено также уменьшение (относительно группы НК) концентрации ФНО-α – на 22,4%, ИЛ-6 – на 23%, ММП-2 – на 38,1% и ММП-9 – на 34,5% (p < 0,05). Кроме того, при- менение комбинации привело к увеличению активности супероксиддисмутазы в сравнении с нелечеными животными на 36,3% (p < 0,05), каталазы – на 57,1%, глутатионпероксидазы – на 37,0% и уменьшению ТБК-АП и пероксида водорода на 42,5 и 20,9% (p < 0,05). На основании полученных иммунобиохимических, физиологических данных, а также результатов изучения макропре- паратов отмечен более выраженный фармакологический эффект комбинации амброксола и глицирризиновой кислоты в сравнении с монопрепаратами этих действующих веществ, что, в свою очередь, повышает клиническую ценность вы- бора в качестве медикаментозной терапии именно комбинированного препарата, например препарата Коделак Бронхо.
На острые респираторные инфекции приходится 20–40% амбулаторной и 12–35% стационарной помощи в многопрофильных стационарах. Инфекции верхних дыхательных путей, включая назофарингит, фарингит, тонзиллит и средний отит, составляют 87,5% от общего числа случаев респираторных инфекций. Подавляющее большинство острых инфекций верхних дыхательных путей вызываются вирусами. В большинстве случаев ОРВИ не требует антимикробной терапии, если толь- ко она не осложняется острым средним отитом с вы- потом, тонзиллитом, синуситом и инфекцией нижних дыхательных путей [1]. Кроме вирусов, инфекции ды- хательных путей часто вызываются бактериями. Наи- более распространенными бактериальными возбуди- телями являются Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae, Moraxella catarrhalis, Staphylococcus aureus и Streptococcus pyogenes. Наряду с прямым негативным действием бакте- риальных токсинов на легочную ткань, в патогенезе ин- фекционного повреждения легких особую роль играет активация ферментов, разрушающих межклеточный ма- трикс, – матриксных металлопротеиназ (ММП). ММП представляют собой семейство цинкзависимых эндо- пептидаз, которые разрушают различные белки во внекле- точном матриксе. Как правило, ММП классифицируют на основе их субстратов и организации их структурных доменов на коллагеназы, желатиназы, стромелизины, ма- трилизины, ММП мембранного типа и другие ММП [2]. ММП секретируются многими клетками, вклю- чая фибробласты, гладкие мышцы сосудов и лейкоциты. ММП регулируются на уровне экспрессии мРНК и пу- тем удаления пропептидного домена из их зимогенной формы. ММП могут влиять на функцию эндотелиаль- ных клеток, а также на миграцию гладкомышечных кле- ток, пролиферацию, кальциевый сигналинг. ММП игра- ют роль в ремоделировании сосудистой ткани в ходе различных биологических процессов, таких как ангио- генез, эмбриогенез, морфогенез и заживление ран. Из- менения активности специфических ММП могут влиять на ремоделирование артерий и приводить к различным патологическим нарушениям, таким как гипертония, преэклампсия, атеросклероз, формирование аневризмы, а также варикозное расширение вен [3]. При наличии инфекционного процесса нарушение функционирования ММП, в частности 2-го и 9-го подти- пов, приводит к развитию фиброза легких. Легочный фиброз возникает после повторного по- вреждения легких, что наблюдается при муковисцидозе, бактериальной пневмонии, идиопатическом легочном фиброзе и остром респираторном дистресс-синдроме. Фиброз легких определяется как дисбаланс между из- быточным образованием коллагена по сравнению с раз- рушением. Фиброз может быть результатом изменения состава коллагена, приводящего к снижению инакти- вации или увеличению синтеза ингибиторов протеаз. В фиброзной ткани легкого по сравнению с нормальной тканью наблюдается бóльшая доля коллагена I типа, чем коллагена III типа. Фиброзная ткань также характеризу- ется повышенным количеством биомолекул, связываю- щих коллаген, таких как фибронектин и протеогликаны, большим количеством гидроксилированных остатков лизина в коллагене и увеличением сшивки коллагена с помощью лизилоксидазы [4]. Помимо фиброза ММП приводят к повышению сосудистой проницаемости и развитию отека легких [5]. Как правило, принципы лечения респираторных инфекций сосредоточены на этиотропном вмешатель- стве, что подразумевает применение противовирусных и при подтвержденной бактериальной инвазии антибак- териальных лекарственных препаратов. К наиболее ши- роко применяемым противовирусным средствам относят препараты прямого противовирусного действия, интер- фероны, индукторы интерферонов и ряд других [6]. В ряду антибактериальных препаратов средством выбора является амоксициллин. Альтернативой мо- гут служить различные цефалоспорины, становящиеся средством первой линии в случае рецидивирующих или хронических инфекций. Возможно также назначение ан- тибиотиков группы макролидов (азитромицин), однако их применение на сегодняшний день ограничено [7]. Помимо этиотропного лечения в терапии ин- фекций дыхательных путей находит место применение средств патогенетической и/или симптоматической на- правленности действия: отхаркивающих и муколитиче- ских лекарственных препаратов. Амброксола гидрохлорид, производное вазици- на, – муколитическое средство, назначается при про- дуктивном кашле. Оказывает стимулирующее действие на синтез легочного сурфактанта и бронхиальную се- крецию, разжижая мокроту, усиливая активность мер- цательного эпителия, тем самым облегчая эвакуацию мокроты за счет повышения эффективности мукоцили- арного клиренса и экспекторации. В нескольких исследованиях показано, что лече- ние амброксола гидрохлоридом тормозит прогрессиро- вание воспаления легочной ткани [8, 9]. Потенциально противовоспалительный эффект амброксола гидрохло- рида может быть связан со снижением окислительного стресса или ингибированием продукции воспалитель- ных цитокинов [10]. Глицирризиновая кислота и ее соли являются ос- новными биологически активными компонентами со- лодки. Глицирризиновая кислота обладает следующими фармакологическими эффектами: противовоспалитель- ным, антиоксидантным, противовирусным, антибакте- риальным, отхаркивающим, иммунорегуляторным и ан- тидиабетическим [11]. Таким образом, представляется актуальным комбинированное применение амброксо- ла гидрохлорида и глицирризиновой кислоты, которое позволит достичь синергетического эффекта, однако вопрос эффективности и рациональности комбини- рованной терапии остается открытым. На российском фармацевтическом рынке широко представлены комби нированные лекарственные препараты для симптомати- ческой терапии инфекций верхних дыхательных путей, особенно на основе амброксола. Фиксированная комби- нация амброксол + натрия глицирризинат представлена в лекарственном препарате Коделак® Бронхо, выпускае- мом в форме сиропа и таблеток. Для более глубокого изучения фармакологиче- ских свойств глицирризиновой кислоты и амброксола в различных сочетаниях (комбинация и монопрепара- ты) рассматривается воспроизведение бактериальной инфекции у крыс (модель in vivo). Такая модель позво- ляет воспроизвести острую воспалительную реакцию по инфекционному типу с включением всех звеньев им- мунного ответа и стадий воспаления. Согласно принципам патологической физиоло- гии, выделяют три основные стадии (фазы) воспали- тельного процесса: альтерация, экссудация, пролифера- ция [12]. Для практикующего врача наиболее важная ста- дия – экссудация, которая характеризуется яркой кли- нической картиной воспаления, проявляясь такими симптомами в рамках респираторной патологии, как по- вышение температуры, различные экссудативные сим- птомы – кашель, заложенность носа и боль, например, в горле. Все это связано как с вирулентной активностью патогена, так и с реакцией иммунной системы на его присутствие. С иммунобиохимической точки зрения стадия экссудации характеризуется как активацией иммунных клеток в ответ на присутствие патогена, так и цитоток- сическим действием – гибелью здоровых клеток в очаге воспаления и в итоге снижением/нарушением функции тканей [13–15]. Для оценки клеточных реакций используют ко- личественное определение уровня медиаторов воспале- ния (цитокинов), к которым относятся фактор некроза опухоли альфа (ФНО-α) и интерлейкин 6 (ИЛ-6), а для оценки цитотоксического действия ввиду активации окислительных реакций – количественное определе- ние уровней тиобарбитуровой кислоты – активных продуктов (ТБК-АП), каталазы, супероксиддисмутазы (СОД), глутатионпероксидазы (ГП), пероксида водоро- да, маркеров сосудистой проницаемости, а также других аналогичных маркеров. Немаловажную роль играет наблюдение за дина- микой ММП, повышение концентраций которых в ряде случаев связано с необратимыми последствиями в тка- нях, что имеет важнейшее значение для оценки хрони- ческих воспалительных процессов. Кроме того, использование такой модели позво- ляет получить макропрепараты легких в фазу экссуда- ции, что, в свою очередь, дает возможность проводить визуальную оценку фактического изменения состояния легочной ткани, в том числе с фармакологической под- держкой данного процесса. Цель исследования – в условиях эксперимента оценить влияние амброксола гидрохлорида, натриевой соли глицирризиновой кислоты и их комбинации на из- менение функционального состояния легочной ткани в условиях инфекционной респираторной патологии. Материал и методы Экспериментальные животные и их содержание. Исследование выполнено на 60 половозрелых кры- сах-самцах линии Wistar массой тела 200–220 г, по- лученных из питомника лабораторных животных «Рапполово» (Россия, Ленинградская область). Перед включением в эксперимент крысы в течение 14 дней содержались в карантинном помещении. На время исследования животные размещались в стандартных макролоновых клетках со свободным доступом к воде и пище. Подстил – древесную гранулированную фрак- цию – меняли один раз в три дня. Условия содержания: температура окружающего воздуха 22 ± 2 °С, относи- тельная влажность 60 ± 5%, при естественной смене суточного цикла (12 часов день/12 часов ночь). Со- держание и проводимые с животными манипуляции соответствовали общепринятым нормам эксперимен- тальной этики (Directive 2010/63 / EU of the European Parliament and of the council on the protection of animals used for scientific purposes, September 22, 2010). Таким образом, коэффициент пересчета дозы составил 0,16. Исследуемые объекты. В качестве изучаемых объ- ектов в данном исследовании выступали субстанции ам- броксола гидрохлорида и натрия глицирризината: • амброксол, субстанция-порошок, серия № VВNL200267 (Shilpa Medicare Limited, Индия), срок годности до 01.09.2023; • тринатрия глицирризинат, субстанция-порошок, серия № 126210301 (Tokiwa Phytochemical Со., LTD., Япония), срок годности до 28.07.2023. Вводимая доза рассчитывалась с учетом межви- дового коэффициента пересчета доз [16]. Способ введе- ния: в виде измельченной порошкообразной массы, пе- рорально через атравматичный зонд. Дизайн исследования. При проведении иссле- дования формировались следующие эксперименталь- ные группы (по 12 особей в каждой, из которых шесть крыс далее были использованы для получения образцов макропрепаратов, а другие шесть – для лабораторно-ин- струментальных методов исследования): 1) интактные животные (ИН) – без патологии; 2) негативный контроль (НК) – с патологией, но без лечения; 3) группа с патологией, получавшая комбинацию амброксол + натриевая глицирризиновая кисло- та, соответствующую препарату Коделак® Бронхо (далее – комбинация амброксол + натрий-ГК), 125 мг/кг + 189 мг/кг; 4) группа с патологией, получавшая монопрепарат амброксол (далее – амброксол) 125 мг/кг; 5) группа с патологией, получавшая монопрепарат натриевой глицирризиновой кислоты (далее – на- трий-ГК) 189 мг/кг. Введение анализируемых веществ осуществляли на протяжении 14 дней в условиях респираторного ин- фекционного процесса (троекратно в сутки), после чего оценивали изменение следующих параметров: • сатурация крови; • проницаемость сосудистого русла легких; • антиоксидантный статус легочной ткани; • концентрация маркеров воспаления и сосуди- стой проницаемости в ткани легких. Экспериментальная модель инфекционного ре- спираторного процесса. Респираторную патологию мо- делировали у крыс по методу, описанному A.W. Cripps и соавт. (1994). Бактериальную культуру S. pneumoniae (коллекционные штаммы) в фосфатно-солевом буфе- ре вводили эндотрахеально через гибкий силиконовый зонд в дозе 50 мкл. С целью достижения обеих долей лег- кого зонд вводили на глубину 1 см. После инъекции бак- териальной культуры производили троекратное введе- ние воздуха в легкие путем нажатия на поршень шприца объемом 1 мл [17]. Оценка сатурации крови. Насыщение крови кис- лородом оценивали с помощью пульсоксиметра, накла- дываемого на основание хвоста животного. Сатурацию оценивали в %. Оценка степени проницаемости сосудов. Степень проницаемости сосудов легких определяли по уровню экстравазации красителя синий Эванса после внутри- венного введения. 2% раствор синего Эванса вводили в яремную вену, после 30 минут экспозиции животное декапитировали, извлекали легкие (n = 6 из группы). Ткань легких гомогенизировали в 1,1 мл HEPES и цен- трифугировали (30 минут, 15 000 об/мин, 40 °C). Далее аликвоту в 500 мкл смешивали с эквивалентным объ- емом 50% раствора ТХУ, термостатировали 12 часов и центрифугировали в вышеописанном режиме. Кон- центрацию синего Эванса определяли методом спек- трофотометрии при 610 нм против HEPES + ТХУ. Для расчета степени проницаемости сосудов использовали стандартную расчетную кривую зависимости «концен- трация – оптическая плотность» [18]. Подготовка биоматериала. Крыс (n = 6 из груп- пы) декапитировали под хлоралгидратной анестезией, извлекали легкие, которые гомогенизировали в механи- ческом гомогенизаторе Поттера с добавлением фосфат- ного буфера (pH 7,4) в соотношении 1:7. Супернатант получали центрифугированием гомогената на холоде в режиме 1000 g 10 минут. В гомогенате оценивали изме- нение концентрации ТБК-АП. В супернатанте методом иммуноферментного анализа (ИФА) определяли актив- ность антиоксидантных ферментов: каталазы, СОД, ГП, пероксида водорода, маркеров воспаления и сосудистой проницаемости. Оценка содержания ТБК-активных продуктов. Концентрацию ТБК-АП оценивали спектрофотометри- ческим методом в реакции конденсации с 2-тиобарбиту- ровой кислотой, в ходе которой образующийся окрашен- ный комплекс имеет максимум поглощения при 532 нм. При этом окраска раствора пропорциональна концентра- ции ТБК-АП. Количество ТБК-АП рассчитывали в пе- ресчете на малоновый диальдегид по величине молярного коэффициента экстинкции (1,56∙105 л∙моль-1∙см-1), полу- ченные результаты выражали в мкмоль/л [19]. Оценка активности каталазы. Активность ка- талазы определяли спектрофотометрическим методом по скорости деструкции пероксида водорода. Количе- ство Н2О2 определяли в реакции с 4% раствором мо- либдата аммония. Интенсивность окраски продукта реакции оценивали при 410 нм. Активность каталазы рассчитывали по разности экстинкций опытной и холо- стой проб, используя коэффициент молярной экстинк- ции перекиси водорода, равный 22,2 × 103 мМ-1см-1, и вы- ражали в Ед/л [20]. Оценка активности супероксиддисмутазы. Ак- тивность СОД оценивали ксантин-ксантиноксидазным методом, основанным на реакции дисмутации супе- роксидного радикала, образующегося в ходе окисления ксантина и восстановления 2-(4-йодофенил)-3-(4-ни- трофенол)-5-фенилтетразолия хлорида. Среда инку- бации содержала ксантин 0,05 ммоль/л, 2-(4-йодофе- нил)-3-(4-нитрофенол)-5-фенилтетразолия хлорид 0,025 ммоль/л, ЭДТА 0,94 ммоль/л, ксантиноксидазу 80 Ед/л, CAPS буфер 40 ммоль/л. Оптическую плотность смеси регистрировали при 505 нм. Активность СОД вы- ражали в ЕД/л [21]. Оценка активности глутатионпероксидазы. Активность ГП определяли в сопряженной глутатион- редуктазной реакции по убыли НАДФН. Среда инку- бации содержала 1 ммоль/л ЭДТА, 50 мМ К,Na-фосфат- ного буфера (рН 7,4), 1 ед. акт./мл глутатионредуктазы, 20 ммоль/л НАДФН, 1 ммоль/л GSH, 30–60 мкг белка на 1 мл среды. Оптическую плотность смеси регистри- ровали на КФК-3 при 340 нм. Реакцию начинали добав- лением субстрата (гидропероксид кумола – 1,5 ммоль/л) и проводили при температуре 25 °С. Активность ГП вы- ражали в ЕД/л [22]. Определение концентрации пероксида водорода. Концентрацию пероксида водорода определяли с ис- пользованием стандартного набора реактивов Amplex Red (Thermo Fisher Scientific). Иммуноферментный анализ. Методом ИФА определяли концентрацию маркеров воспаления: ФНО-α и ИЛ-6, а также показателей, характеризую- щих степень сосудистой проницаемости: содержание ММП-2 и ММП-9. Использовали наборы реактивов производства компании Cloud clone (Хьюстон, США). Ход анализа соответствовал инструкции произво- дителя, прилагаемой к каждому набору. Считывание результатов осуществляли с применением полуавто- матического планшетного ИФА-ридера F50 (Tecan, Австрия). Определение отека легких и описание макро- препаратов. Отек легких оценивали по изменению массового коэффициента легких, рассчитанного как отношение массы легких к массе тела животного, выра- женного в 10-2. Методы статистического анализа. Статистиче- скую обработку полученных результатов производили с использованием прикладного программного пакета Statistica 6.0 (StatSoft, США). Данные выражали в виде M (среднее значение) ± SD. Сравнение групп средних осуществляли методом однофакторного дисперсион- ного анализа (ANOVA) с пост-обработкой при помощи критерия Ньюмена–Кейсла при p < 0,05. Результаты В ходе исследования летальности животных от- мечено не было (выживаемость составила 100%). Об- щее состояние животных с патологией, оцениваемое по изменению положения хвоста, вибриссов, поведения на руках, состояния кожного и шерстяного покрова, было удовлетворительным. Межгрупповые различия массы тела крыс были недостоверны (табл. 1). Оценка насыщения крови кислородом (рис. 1) по- казала, что в группе НК данный показатель был на 16,6% ниже, чем у ИН животных (различие статистически зна- чимо, p < 0,05). На фоне терапии комбинацией амброк- сол + натрий-ГК, амброксолом и натрий-ГК сатурация увеличилась в сравнении с нелечеными животными на 16,59; 15,7 и 11,5% соответственно (p < 0,05 для всех показателей). При изучении изменения проницаемости сосудов легких (рис. 2) установлено, что в группе НК данный по- казатель превосходил аналогичный в группе ИН живот- ных в 19,7 раза (p < 0,05). Применение комбинации амброксол + натрий-ГК, амброксола и натрий-ГК в виде монотерапии способ- ствовало снижению проницаемости сосудов в сравне- нии с группой НК на 39,1% (p < 0,05); 10,5% (p < 0,05) и 23,4% (p < 0,05) соответственно. Эффект от введения комбинации амброксол + на- трий-ГК был статистически значимо выше такового при применении монопрепаратов амброксола и натрий-ГК (рис. 2). Анализ макропрепаратов показал, что у крыс груп- пы НК отмечены выраженные крупноочаговые экстра- вазации красителя синий Эванса, что свидетельствует о выраженном поражении легочной ткани. У живот- ных, получавших фармакотерапию, поражение носило мелкоочаговый характер. Визуально лучшее состояние легочной ткани отмечено в группе комбинации амброк- сол + натрий-ГК. В целом анализ макропрепаратов соот- ветствует полученным значениям проницаемости сосу- дов легочной ткани (рис. 3). сового коэффициента легких (рис. 4) по отношению к группе ИН животных на 32,2% (p < 0,05), тогда как применение комбинации амброксол + натрий-ГК, ам- броксола и натрий-ГК в виде монотерапии приводи- ло к снижению массового коэффициента относитель- но группы НК на 16,4; 12,6 и 10,4% (p < 0,05 для всех показателей). Анализ изменения концентрации маркеров вос- палительного процесса и сосудистой проницаемости (табл. 2) показал, что в группе нелеченых животных со- держание ФНО-α, ИЛ-6, ММП-2 и ММП-9 превосходило показатели интактных крыс в 2,8 (p < 0,05); 3,9 (p < 0,05); 2,6 (p < 0,05) и 3,9 (p < 0,05) раза соответственно. Применение комбинации амброксол + на- трий-ГК способствовало уменьшению (относительно НК группы животных) концентрации ФНО-α – на 22,4% (p < 0,05), ИЛ-6 – на 23% (p < 0,05), ММП-2 – на 38,1% (p < 0,05) и ММП-9 – на 34,5% (p < 0,05), тогда как вве- дение животным амброксола и натрий-ГК не оказало значимого влияния на изменение изучаемых параме- тров (табл. 2). В ходе изучения изменения антиоксидантно- го статуса легочной ткани (табл. 3) установлено, что в группе НК при наличии инфекционной патологии ды- хательной системы наблюдается достоверное (p < 0,05) по отношению к интактным животным снижение актив- ности ферментов эндогенной антиоксидантной защиты: СОД – на 38,9%; каталазы – на 65,0%; ГП – на 71,6%, со- провождаемое повышением концентрации прооксидан- тов ТБК-АП – в 5,3 (p < 0,05) раза и пероксида водоро- да – в 5,5 раза (p < 0,05). У животных, получавших комбинацию амброк- сол + натрий-ГК, отмечено увеличение активности СОД в сравнении с нелечеными животными на 36,3% (p < 0,05), каталазы – на 57,1% (p < 0,05), ГП – на 37,0% (p < 0,05), при уменьшении ТБК-АП на 42,5% (p < 0,05) и пероксида водорода на 20,9% (p < 0,05). Применение амброксола способствовало повы- шению (относительно НК группы крыс) активности ка- талазы и ГП на 14,3% (p < 0,05) и 11,1% (p < 0,05), тогда как применение натрия-ГК приводило к увеличению ак- тивности каталазы на 23,8% (p < 0,05). Влияние комбинации амброксол + натрий-ГК на антиоксидантный статус легочной ткани было до- стоверно (p < 0,05) выше, чем амброксола и натрия-ГК (табл. 3). Заключение Комбинация амброксол + натрий-ГК на рос- сийском фармацевтическом рынке представле- на двумя лекарственными препаратами: Коделак® Бронхо с чабрецом, сироп и Коделак® Бронхо, таблетки. Соотношение действующих веществ в дан- ных лекарственных препаратах послужило основой для планирования дизайна данного исследования. В ходе исследования показано, что применение фик- сированной комбинации амброксола гидрохлорида и натриевой соли глицирризиновой кислоты в дозе 125 мг/кг + 189 мг/кг способствовало уменьшению негативного воздействия инфекционного процесса на функциональное состояние легочной ткани, что выражалось в снижении интенсивности реакций воспаления, окислительного стресса, сосудистой проницаемости, а также повышении насыщаемости крови кислородом. Применение амброксола гидрохлорида и натри- евой соли глицирризиновой кислоты в монотерапии имело достоверно меньший эффект, чем применение комбинации данных веществ. Так, у животных, получав- ших монопрепараты амброксола гидрохлорид и натрие- вая соль глицирризиновой кислоты, несмотря на повы- шение сатурации и снижение проницаемости сосудов легких, не зафиксировано изменений концентрации маркеров воспалительной реакции и сосудистой прони- цаемости. Также обращает на себя внимание, что при приме- нении амброксола гидрохлорида и натриевой соли гли- цирризиновой кислоты наблюдалось менее выраженное изменение антиоксидантного статуса легочной ткани по сравнению с комбинированным применением дан- ных веществ. Это может объясняться воздействием данных субстанций на различные фармакологические таргеты (например, аквапорины) [23]. Таким образом, монопрепараты обладают цитопротективным действи- ем, что поддерживает ткань в период острого воспале- ния, но не оказывают выраженного влияния на ход са- мого воспалительного процесса. Подтверждением этого служит описанный в ли- тературе механизм действия глицирризиновой кислоты и амброксола при воспалительном процессе, который связан с ингибированием реакций гидролиза мембра- ноструктурных фосфолипидов [24, 25]. То есть фар- макологический эффект достигается на поверхности клеток и имеет дозозависимый эффект. В используемых в исследовании эквивалентных концентрациях данный эффект был выражен слабо на модели in vivo. На основании изучения влияния комбинации препаратов на медиаторы воспаления можно предпо- ложить, что их синергизм позволяет воздействовать и на внутриклеточные структуры, в частности на сиг- нальные пути, регулирующие ход воспалительной реакции, например NF-κB и Toll-подобные рецепто- ры (рис. 5). Таким образом, предполагается, что данные вещества оказывают синергичное противовоспали- тельное действие через влияние на некоторые пути миграции иммунных клеток в очаг воспаления за счет влияния как на медиаторы воспаления, так и на дру- гие используемые в исследовании маркеры, например антиоксидантную систему. В частности, известно, что NF-κB связан с регуляцией медиаторов воспаления и процессов гипоксии при остром воспалении [26], что в итоге находит отражение в результате комби- нированного применения глицирризиновой кислоты и амброксола, являющихся действующими веществами препарата Коделак® Бронхо. Установленный фармакологический синергизм позволяет лучше проявить противовоспалительные и антиоксидантные свойства глицирризиновой кислоты и амброксола в сравнении с монопрепаратами. Это край- не важно в разрезе сопоставления полученных результа- тов с динамикой клинической картины острого воспале- ния при респираторной патологии. Как отмечено выше, ключевым для практикующего врача является оказание медицинской помощи пациенту на стадии острого вос- паления (экссудации). Именно эта стадия характеризу- ется повышенной реакцией иммунной системы на при- сутствие патогена, а также наибольшей активностью цитотоксического действия различных биохимических процессов. Кроме того, без эффективного завершения стадии экссудации не может наступить стадия пролифе- рации, то есть восстановления поврежденных участков ткани. По результатам данного исследования, фармако- логическое влияние комбинации препаратов позволяет оказать выраженное противовоспалительное действие на поврежденный орган, таким образом тормозя неже- лательные процессы в стадию экссудации, а также ней- трализовать цитотоксическое действие, свойственное данной стадии острого воспаления. Применение комбинированного препарата при- ближает выздоровление, ускоряя наступление фазы разрешения воспаления (пролиферации) и способствуя лучшей компенсации организма после воспалительного процесса. Выводы По результатам проведенного исследования от- мечается выраженное противовоспалительное действие комбинации глицирризиновой кислоты и амброксола, соответствующей лекарственным препаратам Коделак® Бронхо (таблетки и сироп) на модели бактериальной пневмонии у крыс. Отмечено значительное снижение провоспалительных цитокинов относительно группы НК: ФНО-α – на 22,4% (p < 0,05), ИЛ-6 – на 23% (p < 0,05), ММП-2 – на 38,1% (p < 0,05) и ММП-9 – на 34,5% (p < 0,05). Вместе с тем введение животным амброксола и натрия-ГК по отдельности не оказало значимого вли- яния на изменение изучаемых параметров в используе- мых концентрациях. Также в группе комбинации амброксол + на- трий-ГК отмечено увеличение активности СОД в сравне- нии с нелечеными животными на 36,3% (p < 0,05), ката- лазы – на 57,1% (p < 0,05), ГП – на 37,0% (p < 0,05), при уменьшении ТБК-АП на 42,5% (p < 0,05) и пероксида во- дорода на 20,9% (p < 0,05). Это говорит о выраженном ан- тиоксидантном действии данной комбинации препаратов. Важно отметить и результаты оценки макро- препаратов легких вместе с уровнем проницаемости ткани. Так, в группе НК отмечено повышение массово- го коэффициента легких по отношению к группе ИН на 32,2% (p < 0,05), тогда как применение комбинации амброксол + натрий-ГК, амброксола и натрий-ГК при- водило к снижению массового коэффициента относи- тельно группы Совокупность полученных данных говорит о по- вышении противовоспалительных и антиоксидантных свойств животных в группе, получавшей комбинацию амброксола и глицирризиновой кислоты, по сравнению с группами монопрепаратов в используемых эквива- лентных дозировках. Таким образом, фармакодинамика комбинации амброксола и глицирризиновой кислоты позволяет достичь лучшей клинической динамики при остром и хроническом бронхите, пневмонии, хронической обструктивной болезни легких и бронхоэктатической болезни, что подтверждают результаты представлен- ного исследования как с позиции противовоспали- тельного действия, так и с позиции антиоксидантного действия, в том числе при сравнении с результатами фармакодинамических свойств при применении мо- нопрепаратов при инфекционной патологии. Выде- ленные маркеры воспаления и оксидативного стресса, оцененные в работе, имеют прямую связь с активно- стью самого воспалительного процесса на стадии экс- судации, с которой, в свою очередь, практикующий врач наиболее часто сталкивается при оказании меди- цинской помощи пациенту, в том числе с респиратор- ной патологией. Литература 1. Niederman M.S., Torres A. Respiratory infections. Eur. Respir. Rev. 2022; 31 (166): 220150. 2. MacColl E., Khalil R.A. Matrix metalloproteinases as regulators of vein structure and function: implications in chronic venous disease. J. Pharmacol. Exp. Ther. 2015; 355: 410– 428. 3. Mauris J., Woodward A.M., Cao Z. et al. Molecular basis for MMP9 induction and disruption of epithelial cell-cell contacts by galectin-3. J. Cell. Sci. 2014; 127: 3141–3148. 4. McKleroy W., Lee T.H., Atabai K. Always cleave up your mess: targeting collagen degradation to treat tissue fibrosis. Am. J. Physiol. Lung Cell. Mol. Physiol. 2013; 304: L709– L721. 5. Lim H.J., Kang S.H., Song Y.J. et al. Inhibitory effect of quercetin on Рropionibacterium acnes-induced skin inflammation. Int. Immunopharmacol. 2021; 96: 107557. 6. Saladino R., Barontini M., Crucianelli M. et al. Current advances in anti-influenza therapy. Curr. Med. Chem. 2010; 17 (20): 2101–2140. 7. Jain N., Lodha R., Kabra S.K. Upper respiratory tract infections. Indian J. Pediatr. 2001; 68 (12): 1135–1138. 8. Gao X., Huang Y., Han Y. et al. The protective effects of Ambroxol in Pseudomonas aeruginosa-induced pneumonia in rats. Arch. Med. Sci. 2011; 7: 405–413. 9. Zhi Q.M., Yang L.T., Sun H.C. Protective effect of ambroxol against paraquat-induced pulmonary fibrosis in rats. Intern. Med. 2011; 50: 1879–1887. 10. Kanie S., Yokohira M., Yamakawa K. et al. Suppressive effects of the expectorant drug ambroxol hydrochloride on quartz-induced lung inflammation in F344 rats. J. Toxicol. Pathol. 2017; 30: 153–159. 11. Tan D., Tseng H.H.L., Zhong Z. et al. Glycyrrhizic acid and its derivatives: promising candidates for the management of type 2 diabetes mellitus and its complications. Int. J. Mol. Sci. 2022; 23 (19): 10988. 12. Cripps A.W., Dunkley M.L., Clancy R.L. Mucosal and systemic immunizations with killed Pseudomonas aeruginosa protect against acute respiratory infection in rats. Infect. Immun. 1994; 62 (4): 1427–1436. 13. Smith P., Jeffers L.A., Koval M. Measurement of lung vessel and epithelial permeability in vivo with Evans Blue. Methods Mol. Biol. 2021; 2367: 137–148. 14. Стальная И.Д., Гаришвили Т.Г. Метод определения ма- лонового диальдегида с помощью ТБК. В кн.: Совре- менные методы в биохимии. Под ред. В.Н. Ореховича. М.: Медицина, 1977: 44–46. 15. Королюк М.А. Метод определения активности катала- зы. Лабораторное дело. 1988; 1: 16–19. 16. Woolliams J.A., Wiener G., Anderson P.H., McMurray C.H. Variation in the activities of glutathione peroxidase and superoxide dismutase and in the concentration of copper in the blood in various breed crosses of sheep. Res. Vet. Sci. 1983; 34 (3): 253–256. 17. Pierce S. Tappel A.L. Glutathione peroxidase activities from rat liver. Biochim. Biophys. Acta. 1978; 523 (1): 27–36. 18. Ma S.K., Nam K.I., Kim S.W. et al. Increased renal expression of aquaporin-3 in rats inhibited type 2 11beta-hydroxysteroid dehydrogenase. Kidney Blood Press. Res. 2007; 30 (1): 8–14. 19. Beeh K.M., Beier J., Esperester A., Paul L.D. Antiinflammatory properties of ambroxol. Eur. J. Med. Res. 2008; 13 (12): 557–562. 20. Xie C., Li X., Wu J. et al. Anti-inflammatory activity of magnesium isoglycyrrhizinate through inhibition of phospholipase A2/arachidonic acid pathway. Inflammation. 2015; 38 (4): 1639–1648. 21. Титова О.Н., Кузубова Н.А., Лебедева Е.С. Роль гипок- сийного сигнального пути в адаптации клеток к ги- поксии. РМЖ. Медицинское обозрение. 2020; 4 (4): 207–213. 22. Патофизиология. Учебник. В 2 томах. Под ред. В.В. Новицкого, Е.Д. Гольдберга, О.И. Уразовой. 4-е изд., перераб. и доп. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. Т. 1. 23. Rogers L.K., Cismowski M.J. Oxidative stress in the lung – the essential paradox. Curr. Opin. Toxicol. 2018; 7: 37–43. 24. Thimmulappa R.K., Chattopadhyay I., Rajasekaran S. Oxidative stress mechanisms in the pathogenesis of environmental lung diseases. In: Oxidative Stress in Lung Diseases. 2019: 103–137. 25. Bezerra F.S., Lanzetti M., Nesi R.T. et al. Oxidative stress and inflammation in acute and chronic lung injuries. Antioxidants. 2023; 12 (3): 548. 26. FDA Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers. URL: https://www.fda.gov/regulatory-information/ search-fda-guidance-documents/estimating-maximum- safe-starting-dose-initial-clinical-trials-therapeutics- adult-healthy-volunteers