ВЛИЯНИЕ ПРЕПАРАТА БАД «БУДУ ПАПОЙ. В 40 КАК В 20» НА ФРАГМЕНТАЦИЮ ДНК СПЕРМАТОЗОИДОВ ПРИ ЛЕЧЕНИИ ПАЦИЕНТОВ С ПАТОСПЕРМИЕЙ
Кореньков Д.Г., Жиганшин Д.М. Влияние препарата БАД «Буду Папой. В 40 как в 20» на фрагментацию ДНК сперматозоидов при лечении пациентов с патоспермией. Фармакология & Фармакотерапия. 2024; 1: 80–85. DOI 10.46393/27132129_2024_1_80
По статистике, в России около 17% браков являются бесплодными и каждая 6-я супружеская пара сталкивается с труд- ностями при попытках зачатия, причем в половине случаев это связано с мужским фактором бесплодия. Материал и методы. В открытом проспективном контролируемом исследовании приняли участие 40 мужчин в возрас- те от 25 до 45 лет с нарушением репродуктивной функции в форме олиго-, и/или астено-, и/или тератозооспермии и по- вышенным уровнем фрагментации ДНК сперматозоидов, который превышал нормативные значения (основная груп- па), и 30 здоровых мужчин (контрольная группа). Все пациенты основной группы принимали биологически активную добавку (БАД) «Буду Папой. В 40 как 20» в капсулах 825 мг по 1 капсуле 2 раза в день в течение 3 недель. На 4-ю неделю назначалась БАД «Буду Папой. В 40 как в 20 форте» в саше 10 г по 1 саше в день. Смена формы препарата была обу- словлена изучением комплаентности пациентов. Критерием эффективности проводимой терапии служило улучшение основных показателей спермограммы (объем эякулята, концентрация сперматозоидов, количество подвижных форм (А+В), процент дегенеративных форм сперматозоидов, снижение фрагментации ДНК сперматозоидов и улучшение ан- тиоксидантной защиты организма). Результаты. Объем эякулята у пациентов основной группы до лечения в среднем составил 2,1 мл, а через месяц терапии увеличился в среднем до 2,4 мл. Концентрация сперматозоидов у пациентов основной группы до лечения была снижена в среднем до 33 млн/мл и составляла только 46,8% от значений контрольной группы. Через месяц приема препарата регистрировался небольшой рост концентрации сперматозоидов – до 35 млн/мл. Доля сперматозоидов с поступатель- ным движением (прогрессивно-подвижных) резко увеличилась – с 11 до 37% (p < 0,01). Количество дегенеративных форм сперматозоидов уменьшилось с 58 до 38%. Показатель степени фрагментации ДНК сперматозоидов был выше нормативных значений и составлял в среднем 24,0%, а после лечения снизился до 16,5%. Средний уровень супероксид- дисмутазы (СОД) в эякуляте пациентов основной группы (при норме 118 ммоль/л) составил 75 ммоль/л, а через месяц лечения – 80 ммоль/л. Средний уровень СОД в крови (при норме 124 ммоль/л) до лечения составлял 104 ммоль/л, через месяц – в среднем 111 ммоль/л (увеличение на 4,5%). При изначально сниженной антиоксидантной защите организма после лечения отмечена достоверная активация антиоксидантной системы. Заключение. Использование препарата БАД «Буду Папой. В 40 как 20» при патоспермии является перспективным ви- дом терапии, которая позволяет улучшить основные показатели спермограммы, снизить фрагментацию ДНК в сперма- тозоидах, повысить антиоксидантную защиту организма, что способствует естественному зачатию у супружеских пар. Введение В России около 17% браков являются бесплодными и каждая 6-я супружеская пара в тот или иной период сталки- вается с трудностями при попытках зачатия, причем в поло- вине случаев это связано с мужским фактором бесплодия [1]. В последнее время, по данным Всемирной организации здра- воохранения (ВОЗ), заметна общая тенденция к снижению качества фертильного эякулята; особое внимание привле- кает плохое качество сперматозоидов, которое становится причиной не только отсутствия беременности, но и нару- шений развития плода, врожденных аномалий у детей [2, 3]. Нарушение сперматогенеза связано с изменением биохи- мии клетки, клеточных структур и биологических мембран. Важная роль при этом отводится продуктам свободноради- кального окисления, антиоксидантного стресса, снижению антиоксидантной защиты организма, использованию анти- оксидантов, защищающих организм от патологического воз- действия свободных радикалов [4–8]. Доля сперматозоидов с хромосомными нарушениями наследственного материала очень важна, с одной стороны, для способности к оплодотворению, а с другой – для определения риска репродуктив- ных потерь. Однако показатель генетической целостности сперматозоида – индекс фрагментации ДНК нельзя опре- делить с помощью обычной спермограммы. Основными факторами разрывов ДНК считают оксидативный стресс, снижение собственной антиоксидантной защиты организма и процессы изменения структуры хроматина в ходе спер- матогенеза и апоптоза. Фармакологическая терапия заклю- чается в устранении причин и стимуляции сперматогенеза. Стимуляция сперматогенеза обычно осуществляется за счет активизации процесса апоптоза изначально нежизнеспособ- ных половых клеток. Исключение составляют методы специ- фической гормональной стимуляции. В настоящее время в лечении мужской инфертиль- ности используются комплексы биологически активных ве- ществ, обладающих антиоксидантными свойствами [9–12]. К таким многокомпонентным антиоксидантным комплек- сам относится комбинированный препарат для повышения мужской фертильности биологически активная добавка (БАД) «Буду Папой. В 40 как в 20» в виде капсул и БАД «Буду Папой. В 40 как в 20 форте» в виде пакетов-саше (производ- ство ООО «Ньюман Нутриентс АГ», Россия). Свойства компонентов, входящих в состав препарата БАД «Буду Папой. В 40 как в 20» L-карнитин продуцируется придатком яичка. Это органическое соединение, необходимое для выработки бел- кового материала и улучшающее обменные процессы в муж- ских половых клетках. Является важным биохимическим маркером нормального созревания сперматозоидов [13]. L-карнитин обладает антиоксидантной активностью и способствует стабилизации клеточной мембраны сперма- тозоидов, которая нарушается при гиперпродукции актив- ных форм кислорода (АФК), являющихся важным патоге- нетическим фактором патоспермии у мужчин [14], а также выработке большого количества энергии для сперматогенеза и повышению выработки тестостерона. Липоевая кислота – эндогенный антиоксидант. Улуч- шает работу печени и ускоряет обмен холестерина (чем не- посредственно влияет на уровень тестостерона), защищает сперматозоиды от окисления. Прекрасно дополняет L-кар- нитин и витамины группы В [15, 16]. Цинк преимущественно секретируется в предстатель- ной железе, в большом количестве содержится в созреваю- щих сперматозоидах, поскольку его количество коррелирует с уровнем потребления кислорода и стабильностью ядерного хроматина [17]. Уменьшение концентрации цинка в эякуля- те свидетельствует о понижении качества сперматозоидов, особенно это влияет на их подвижность. Физиологическая роль цинка, содержащегося в секрете простаты, заключает- ся в разобщении головки и хвоста сперматозоидов, а также подготовке генетического материала к слиянию. Существует прямая связь между обеспеченностью организма мужчины цинком и его фертильностью. Цинк необходим для всех про- цессов, связанных с усиленным клеточным делением, осо- бенно сперматогенеза. Он активно участвует в синтезе белков и обмене нуклеиновых кислот (ДНК и РНК), стабилизируя их структуру. Цинк входит в состав супероксиддисмутазы (СОД), одного из ключевых антиоксидантных ферментов. Особую ценность представляет связь цинка и тестостерона. Микроэлемент отвечает за образование разных гормонов. Но особенно важную роль он играет в синтезе тестостерона. В первую очередь цинк останавливает распад этого гормона и его трансформацию в эстроген. Таким образом, цинк повы- шает уровень тестостерона и в то же время понижает уровень эстрогенов (женских половых гормонов). Потенциально это способствует улучшению здоровья простаты у мужчин. Пиридоксин (В6) участвует во множестве биохимиче- ских реакций организма, в частности, из него синтезируются ферменты. Витамин В6 принимает участие в обменных про- цессах с участием липидов и белков. Способствует норма- лизации половой функции у мужчин, повышению либидо и усилению эрекции [18]. Фолиевая кислота (В9) принимает участие в синте- зе ДНК, препятствует фрагментации ДНК сперматозоидов. Помогает существенно снизить количество сперматозоидов (до 30%), несущих искаженную генетическую информацию. Поэтому фолиевая кислота является важным элементом для улучшения показателей спермограммы [19]. Витамин Е – наиболее распространенный в природе антиоксидант – является липофильной молекулой, способной инактивировать свободные радикалы непосредственно в ги- дрофобном слое мембран и таким образом предотвращать развитие цепи перекисного окисления. Различают 8 типов то- коферолов, наиболее активен α-токоферол. Витамин Е (α-то- коферол) ингибирует свободнорадикальное окисление путем отдачи электрона, что приводит к инактивации радикала ли- пида, а витамин Е превращается в стабильный, полностью окисленный токоферолхинон. Пероральный прием витамина вызывает заметное увеличение подвижности сперматозоидов за счет снижения перекисного окисления липидов [20]. Селен является микроэлементом, способным защи- щать репродуктивную систему мужчины от токсических повреждений АФК, т.е. уменьшать оксидативный (окисли- тельный) стресс. Также селен необходим для созревания спер- матозоидов и нормального развития яичек. При дефиците селена процесс сперматогенеза нарушается за счет атрофии сперматогенного эпителия. Он участвует в биосинтезе тесто- стерона, а также выводит соли тяжелых металлов [21, 22]. Цель настоящей работы – изучить влияние препарата БАД «Буду Папой. В 40 как в 20» на уровень фрагментации ДНК сперматозоидов, оксидативный стресс и показатели спермограммы. Материал и методы Исследование проводилось в центре «Передовые ре- продуктивные технологии» (ООО «АФС», Санкт-Петербург). В открытом проспективном контролируемом исследовании приняли участие 40 мужчин в возрасте от 25 до 45 лет с на- рушением репродуктивной функции в форме олиго-, и/или астено-, и/или тератозооспермии и повышенным уровнем фрагментации ДНК сперматозоидов, который превышал нор- мативные значения (основная группа), и 30 здоровых мужчин (контрольная группа). Пациенты основной группы принима- ли препарат БАД «Буду Папой. В 40 как в 20» в виде капсул и БАД «Буду Папой. В 40 как в 20 форте» в виде пакетов-саше. Критериями включения в исследование являлись: • отсутствие беременности в браке более 12 месяцев половой жизни без контрацепции; • возраст от 25 до 45 лет включительно; • нарушение репродуктивной функции в форме олиго-, и/или астено-, и/или тератозооспермии и повышенный уровень фрагментации ДНК спер- матозоидов; • отсутствие инфекций репродуктивного тракта (Chlamydia trachomatis, Ureaplasma urealyticum, Mycoplasma hominis, Trichomonas vaginalis), диагностированных методом полимеразной цепной реакции; • отсутствие клинических и лабораторных признаков вос- палительного процесса дополнительных половых желез; • отсутствие аутоиммунных реакций против сперма- тозоидов, сопровождающихся выработкой антиспер- мальных антител; • концентрация сперматозоидов не менее 10 млн/мл; • отсутствие эякуляторных нарушений; • отсутствие травм половых органов; • отсутствие выраженной соматической патологии; • способность пациента понять суть клинического иссле- дования и дать письменное согласие на участие в нем. Критериями исключения были: • азооспермия; • концентрация сперматозоидов менее 5 млн/мл; • острые воспалительные заболевания брюшной по- лости (острый аппендицит, язвенный колит, энтерит, болезнь Крона и т.д.); • врожденные аномалии развития половых органов (гипоплазия яичек, крипторхизм, гипоспадия и др.); • острые воспалительные заболевания органов моче- выделительной системы (цистит, пиелонефрит и т.д.) на этапе скрининга; • нейрогенные дисфункции мочевого пузыря, склероз шейки мочевого пузыря, стриктура уретры, добро- качественная гиперплазия предстательной железы (объем простаты > 30 см3), камень/камни мочевого пузыря, рак мочевого пузыря или простаты, диверти- кулы мочевого пузыря, другие заболевания мочевого пузыря, потребовавшие лечения; • клиническая картина герпесвирусной инфекции на визите скрининга; • эндокринные заболевания (сахарный диабет 1-го и 2-го типа, врожденная гиперплазия коры надпочеч- ников и др.) по данным анамнеза; • аутоиммунные заболевания, в том числе наличие ан- тиспермальных антител (MAR-IgG > 50%); • хронический алкоголизм / наркомания; • неспособность адекватно отвечать на вопросы иссле- дователя, заполнять необходимые документы и при- нимать исследуемый препарат; • участие в любом клиническом исследовании с приме- нением лекарственных препаратов в течение послед- них 3 месяцев; • развитие у пациента состояний, препятствующих, по мнению врача-исследователя, продолжению его участия в исследовании. После определения соответствия пациента критери- ям включения/исключения собирали анамнез, проводили физикальный осмотр. Пациентам выполняли спермограмму (по нормам ВОЗ 2010 г.), проводили MAR-тест IgG. Показа- тель антиоксидантной защиты – уровень СОД исследовали в крови и эякуляте методом индуцированной хемилюми- несценции с помощью биохемилюминатора БХЛ-06. Также у всех пациентов определяли уровень фрагментации ДНК в сперматозоидах методом TUNEL. Все пациенты основной группы принимали БАД «Буду Папой. В 40 как 20» в капсулах 825 мг по 1 капсуле 2 раза в день в течение 3 недель. На 4-ю неделю назначали БАД «Буду Папой. В 40 как в 20 форте» в саше 10 г по 1 саше в день. Смена формы препарата была обусловлена изучени- ем комплаентности пациента к приему препарата. На кон- трольном визите через месяц лечения оценивались компла- ентность, клинические и лабораторные данные. Для описательной статистики использовали медиану (среднее) и интерквартильное расстояние (распределение). Сравнение параметров до и после проводили при помощи теста Уилкоксона (для сравнения парных параметров в непа- раметрической статистике). Результаты и обсуждение Полученные данные свидетельствуют о существен- ных и достоверных изменениях основных показателей спер- мограммы пациентов практически на всех этапах исследова- ния Полученные данные свидетельствуют о статистиче- ски значимых изменениях основных показателей спермо- граммы у пациентов, принимавших препарат БАД «Буду Папой. В 40 как в 20». Объем эякулята у пациентов основ- ной группы до лечения составлял в среднем 2,1 мл (от 1,5 до 6,5 мл), а через месяц терапии увеличился в среднем до 2,4 мл (от 1,6 до 6,7 мл). Этот показатель косвенно свидетельствует о нормальной эякуляторной функции предстательной желе- зы и функции семенных пузырьков. Концентрация сперматозоидов у пациентов основ- ной группы до лечения была значительно и высокодосто- верно (р < 0,01) снижена в среднем до 33 млн/мл (от 8 до 61 млн/мл) и составляла только 46,8% от среднего значения в контрольной группе – 70 млн/мл (от 60 до 79 млн/мл). Че- рез месяц приема препарата БАД «Буду Папой. В 40 как в 20» концентрация сперматозоидов немного возросла – в сред- нем до 35 млн/мл (от 14 до 64 млн/мл). Подвижность является достаточно важным показате- лем спермограммы и доказанно влияет на оплодотворяющую способность спермы. Доля сперматозоидов с поступатель- ным движением (прогрессивно-подвижных) резко увеличи- лась – с 11 до 37% (высокодостоверный показатель p < 0,01). Изменение уровня морфологически дегенеративных форм сперматозоидов обусловлено физиологией процесса апоптоза. Этот процесс достаточно сложно поддается коррек- ции. Часто требуется более значимый временной интервал ле- чения для приведения этого показателя к значениям клиниче- ской нормы. Однако назначение исследуемого препарата даже на короткий срок способствовало достоверному снижению де- генеративных форм с 58% (от 55 до 60%) до 38% (от 36 до 39%). Средний показатель MAR-IgG до и через месяц после приема препарата практически не изменился, так как изна- чально в исследование отбирались пациенты исключительно с его отрицательным результатом. Количество лейкоцитов в основной группе до лече- ния составило в среднем 0,46 млн/мл (от 0,2 до 1,1 млн/мл). После лечения отмечено незначительное уменьшение уровня лейкоцитов в тесте с пероксидазой – в среднем до 0,45 млн/мл (от 0,1 до 1,1 млн/мл). Степень фрагментации ДНК сперматозоидов была выше нормативных значений и варьировала от 17 до 60% (в среднем 24,0%), а после лечения средний показатель соста- вил 16,5% (от 8,1 до 45,2%). У всех 40 пациентов отмечалось снижение уровня фрагментации ДНК сперматозоидов. Ре- зультаты анализа полученных данных после лечения пока- зали высокую эффективность применения препарата БАД «Буду Папой. В 40 как в 20» уже через месяц после начала его приема (табл. 2, рис. 2). Средний уровень СОД в эякуляте пациентов ос- новной группы исходно составил 75 ммоль/л (при норме 118 ммоль/л), а через месяц после лечения – 80 ммоль/л (от 76 до 86 ммоль/л). Средний уровень СОД в крови (при норме 124 ммоль/л) до лечения составлял 104 ммоль/л (от 92 до 119 ммоль/л), а через месяц применения препара- та БАД «Буду Папой. В 40 как в 20» – 111 ммоль/л (от 98 до 117 ммоль/л), таким образом, наблюдалось увеличение сред- него показателя на 4,5%. При изначальном снижении антиок- сидантной защиты организма после лечения отмечена досто- верная активация антиоксидантной системы (табл. 3, рис. 3). В последние годы акцентируется внимание на роли окислительного стресса в формировании мужского беспло- дия. По данным научной литературы, одним из патогенети- ческих факторов риска снижения мужской фертильности является гиперпродукция АФК, к которым относят оксид азота и свободные радикалы, повреждающие ДНК хромосом и мембраны сперматозоидов, инициирующие их апоптоз, что приводит к снижению концентрации сперматозоидов, ухуд- шению их подвижности и оплодотворяющей способности, что и называют окислительным стрессом сперматозоидов. Ча- стота окислительного стресса варьирует от 30 до 80%. Клетки нашего организма обладают определенными биохимически- ми механизмами, которые позволяют держать под контролем выработку свободных радикалов. Например, в клетках содер- жатся особые антиоксидантные энзимы (ферменты, т.е. рас- щепляющие вещества), снижающие концентрацию молекул с непарными электронами. В частности, к первичным антиок- сидантным энзимам относится СОД. Эти вещества представ- ляют собой «первый эшелон» антиоксидантной обороны. Они регулируют уровень свободных радикалов, вступая с ними (а также с другими молекулами, которые потенциально могут стать свободными радикалами) в безопасные нейтрализую- щие реакции. Поэтому очень важно определять естественные, собственные механизмы антиоксидантной защиты организ- ма, уровень СОД. Вместе с тем ряд необходимых антиоксидан- тов сам организм не производит и получает их только извне, с пищей или пищевыми добавками. Настоящее исследование было проведено для оценки возможного применения БАД «Буду Папой. В 40 как в 20» и БАД «Буду Папой. В 40 как в 20 форте» у пациентов с па- тоспермией. Обе формы препарата показали свою эффективность и безопасность. Мнения пациентов по поводу удобства приема той или иной формы БАД разделились практически поровну. Пациенты отмечали удобство приема капсул (не надо разво- дить в воде) и однократный прием БАД в форме саше. Важ- ным выводом этого исследования служит то, что даже при непродолжительном приеме препарат БАД «Буду Папой. В 40 как в 20» показал очень хорошую эффективность в срав- нении с плацебо. Следовательно, препарат можно рекомен- довать при подготовке к программам вспомогательных репродуктивных технологий (ИИСМ, ЭКО, ЭКО-ИКСИ) и криопротоколам. Заключение Проведенное исследование использования БАД «Буду Папой. В 40 как в 20» и БАД «Буду Папой. В 40 как в 20 фор- те» показало положительное воздействие на все показатели спермиологических тестов у пациентов с патоспермией: • увеличение объема эякулята; • увеличение концентрации сперматозоидов; • повышение подвижности сперматозоидов; • снижение количества дегенеративных форм спер- матозоидов; • снижение фрагментации ДНК сперматозоидов; • улучшение антиоксидантной защиты организма. Таким образом, БАД «Буду Папой. В 40 как в 20» и БАД «Буду Папой. В 40 как в 20 форте» улучшает качество семенной жидкости, повышает репродуктивную способ- ность, поддерживает репродуктивную функцию для успеш- ного зачатия (а также при подготовке к ЭКО и криоконсер- вации). Для большего эффекта с учетом сперматогенеза це- лесообразно принимать препарат более длительное время (от 3 до 6 месяцев). При выявлении патоспермии целесообразно реко- мендовать БАД «Буду Папой. В 40 как в 20» и БАД «Буду Па- пой. В 40 как в 20 форте» в качестве антиоксиданта в составе комплексной терапии. Продолжительность приема целесо- образно планировать на срок не менее 30 дней. Литература 1. Божедомов В.А. Мужской фактор бездетного брака – пути решения проблемы. Урология. 2016; (1–S1): 28–34. 2. WHO manual for the standardized investigation, diagnosis and management of the infertile male. Cambridge: Cambridge University Press, 2000. 3. WHO laboratory manual for the examination and processing of human semen. Geneva: WHO, 2010. 4. Imamovic Kumalic S., Pinter B. Review of clinical trials on effects of oral antioxidants on basic semen and other parameters in idiopathic oligoasthenoteratozoospermia. Biomed. Res. Int. 2014; 2014: 426951. 5. Божедомов В.А., Николаева М.А., Теодорович О.В. Норма- лизация акросомальной реакции сперматозоидов в резуль- тате комплексной терапии карнитином, фруктозой и ли- монной кислотой. Проблемы репродукции. 2005; 4: 84–89. 6. Lenzi A., Lombardo F., Sgrò P. et al. Use of carnitine therapy in selected cases of male factor infertility: a double-blind crossover trial. Fertil. Steril. 2003; 79 (2): 292–300. 7. Sigman M., Glass S., Compagnone J., Pryor J.L. Carnitine for the treatment of idiopathic asthenospermia: a randomized, double-blind, placebo-controlled trial. Fertil. Steril. 2006; 85 (5): 1409–1414. 8. Нашивочникова Н.А., Крупин В.Н., Селиванова С.А. Антиок- сидантная терапия бесплодного брака. Урология. 2015; 3: 71–74. 9. Сухих Г.Т., Попова А.Ю., Овчинников Р.И., Ушакова И.В. Влияние комплекса Сперотон на функциональные харак- теристики сперматозоидов у мужчин с идиопатической патоспермией. Проблемы репродукции. 2016; 40: 106–110. 10. Калинченко С.Ю., Тюзиков И.А. Практическая андрология. М.: Практическая медицина, 2009. 11. Гамидов С., Авакян А. Идиопатическое бесплодие у мужчин: эпидемиология, этиология, патогенез, лечение. Врач. 2013; 7: 2–4. 12. Marnett L.J., Riggins J.N., West J.D. Endogenous generation of reactive oxidants and electrophiles and their reactions with DNA and protein. Clin. Invest. 2003; 111 (5): 583–593. 13. Loumbakis P., Anezinis P., Evangeliou A. et al. Effect of L-carnitine in patients with asthenospermia. Eur. Urol. 1996; 30 (2): 255. Abstract 954. 14. Balercia G., Regoli F., Armeni T. et al. Placebo-controlled double blind randomized trial on the use of L-carnitine, L-acetylcarnitine, or combined L-carnitine and L-acetylcarnitine in men with idiopathic asthenozoospermia. Fertil. Steril. 2005; 84 (3): 662–671. 15. Reed L.J., DeBusk B.G., Gunsalus I.C., Hornberger C.S. Jr. Cristalline alpha-lipoic acid: a catalytic agent associated with pyruvate dehydrogenase. Science. 1951; 114 (2952): 93–94. 16. Reed L.J. The chemistry and function of lipoic acid. Adv. Enzymol. 1957; 18: 319–347. 17. Kruczynski D., Passia D., Haider S.G., Glassmeyer M. Zinc transport through residual bodies in the rat testis; a histochemical study. Andrologia. 1985; 17: 98–103. 18. Wong W.Y., Merkus H.M., Thomas C.M. et al. Effects of folic acid and zinc sulfate on male factor subfertility: a double-blind, randomized, placebo-controlled trial. Fertil. Steril. 2002; 77 (3): 491–498. 19. Costa M., Canale D., Filicori M.D. et al. L-carnitine in idiopathic asthenozoospermia: a multicenter study. Andrologia. 1994; 26 (3): 155–159. 20. Kessopoulou E., Powers H.J., Sharma K.K. et al. A double-blind randomized placebo cross-over controlled trial using the antioxidant vitamin E to treat reactive oxygen species associated male infertility. Fertil. Steril. 1995; 64 (4): 825–831. 21. Селен в жизни человека и животных. Под ред. Л.П. Никитиной, В.М. Иванова. М.: МП Союзинформбиология, 1995. 242 с. 22. Herzberg M., Lusky A., Blonder J. The effect of estrogen replacement therapy on zinc in serum and urine. Obstet. Gynecol. 1996; 87 (6): 1035–1040.